大家好，科普达人来为大家解答以上问题，退火温度一般怎么确定，退火温度一般是多少很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

唉，这种问题是中国特色，完全理论脱离实际。PCR的退火温度是一个范围，一般是50-65度，两步PCR是70度。其中模板的GC含量，模板的组成(单个模板或者cDNA或者全基因组DNA或者别的什么)等等都会影响tm值。谁也说不准多少比较好，都是具体情况具体分析。有时候设计引物的时候需要进行温度梯度测试，设计出来的tm不一定是最合适的tm。不得不说，在这个问题上直接问一个数字，纯粹是闭门造车，没有实验经验。只会凭空想，想对了也得不到什么有用的知识。好吧，如果非要说一个数字的话，一般是55度左右。我更喜欢56度的回答。50度还是低。对于稍微复杂的模板，非特异性扩增的可能性